地龙提取物抑制核因子κB信号通路延缓椎间盘髓核细胞的退变

本文刊于: 《中国组织工程研究》 2021年第0期

关键词:
椎间盘 退变 髓核细胞 地龙 提取物 核因子κB 因子

Keywords:
bone,intervertebral disc,degeneration,nucleus pulposus cells,Pheretima,extract,nuclear factor-κB,factor
摘要
     背景:髓核细胞炎症微环境是促进髓核退变的重要因素,炎症因子通过激活核因子κB信号通路产生炎症级联反应,形成恶性循环,加速髓核退变进程。抑制核因子κB信号通路活性,可延缓椎间盘退变进展。目的:探讨地龙提取物对髓核细胞退变的作用机制。方法:采用冷浸法提取地龙活性成分,CCK-8法检测0,25,50,100,200,400 mg/L地龙提取物对大鼠髓核细胞活性的影响,筛选合适药物浓度用于后续实验。采用肿瘤坏死因子α诱导髓核细胞退变模型,选取50,100,200 mg/L地龙提取物作用于细胞模型,通过Western blot法检测聚蛋白聚糖、Ⅱ型胶原、肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的蛋白表达;实时荧光定量PCR检测肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的mRNA表达;采用细胞免疫荧光法检测核因子κB信号通路关键分子P65的入核表达。结果与结论:①与空白组(0 mg/L地龙提取物)比较,400 mg/L地龙提取物抑制髓核细胞活性,其余浓度对髓核细胞活性无明显影响,选用50,100,200 mg/L地龙提取物用于后续实验;②与正常组(不作处理)比较,模型组聚蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达水平降低,肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的蛋白和mRNA水平上调,P65入核增加;③与模型组比较,地龙提取物能增加细胞外基质成分聚蛋白聚糖、Ⅱ型胶原蛋白表达,下调炎症因子肿瘤坏死因子α和白细胞介素6的mRNA和蛋白表达水平,减少P65在核内的表达;④结果表明,地龙提取物能够减少炎症因子表达,增加细胞外基质合成,抑制核因子κB信号通路活性,地龙提取物可能通过作用于核因子κB信号通路进而延缓椎间盘髓核细胞退变。

基金项目:
深圳市科技创新委员会项目(JCYJ20170307155040463),项目负责人:何升华;广东省中医药局科研课题(20191276),项目负责人:何升华~~

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