中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导、保存及植株再生研究

Studies on Callus Induction、Subculture and Plant Regenegation of ’Nubiana’(Prunus Salicina ’Nubiana’)

作者: 专业:果树学 导师:李国怀 年度:2010 学位:硕士  院校: 华中农业大学

Keywords

Prunus salicina, callus, leaf, petiole, in vitro culture

        本研究以中国李(Prunus salicina)品种’Nubiana’试管苗叶片和叶柄为材料,通过对基本培养基、激素种类及浓度配比、琼脂浓度、培养条件及外源添加物的研究,初步建立了中国李’Nubiana’愈伤组织诱导、保存及植株再生体系;研究了激素种类及浓度配比、培养条件对叶柄培养与植株再生的影响。主要研究结果如下:1、中国李’Nubiana’愈伤组织诱导的适宜外植体类型为叶片和叶柄。2、以叶片和叶柄为外植体,诱导中国李’Nubiana’愈伤组织的适宜培养基配方为WPM+2,4-D 2.0 mg-L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+葡萄糖30.0 g·L-1+琼脂5.0 g·L-1;选取叶龄为28 d左右的试管苗叶片叶柄,暗培养28 d。3、中国李’Nubiana’愈伤组织保存适宜的培养基配方为LP+2,4-D 1.0 mg·L-1+6-BA0.5mg·L-1+蔗糖40.0 g·L-1+CH 0.4 g·L-1+琼脂6.0 g·L-1;21 d左右继代一次,持续暗培养保存。4、中国李’Nubiana’愈伤组织植株再生适宜的培养基配方为WPM+NAA 0.5 mg·L-1+6-BA 2.0 mg·L-1+TDZ 2.0 mg·L-1+蔗糖30.0 g·L-1+琼脂6.8 g·L-1,光下培养,再生率为6.7%。5、中国李’Nubiana’叶柄培养及植株再生的适宜培养基为WPM+TDZ 0.5 mg·L-1+蔗糖30.0 g·L-1+琼脂6.0 g·L-1;选取叶龄为21 d左右的试管苗叶柄,暗培养14 d,再生率可达35%。中国李’Nubiana’叶柄再生表现出明显的极性,不定芽一般出现在叶柄的近轴端。
    Experiment was conducted with the young leaf and petiole in vitro of ’Nubiana’ (Prunus salicina) for studying the effects of different basic culture media, hormone levels, agar content, organic addition on the callus inducement、subculture and plant regeneration. And the effects of hormone levels, culture time and agar content on the adventitious plant regeneration of ’Nubiana’ were also studied. The main results were as follows:Firstly, the optimal explants for callus induction of ’Nubiana’ were leaves and petioles.Secondly, the optimal medium for leaves and petioles callus induction of ’Nubiana’ was WPM+2,4-D 2.0 mg·L-1+6-BA 1.0 mg·L-1+glucose 30.0 g·L-1+agar 5.0 g·L-1. Selecting explants which had been sub-cultured around 28 d, the best duration of dark was 28 d.Thirdly, the optimal medium for callus subculture of ’Nubiana’ was LP+2,4-D 1.0 mg·L-1-BA 0.5 mg·L-1+sucrose 40.0 g·L-1+CH 0.4 g·L-1+agar 6.0 g·L-1. Selecting explants which had been sub-cultured around 21 d, the callus was sub-cultured in darkness all alone.Fourth, the optimal medium for callus regeneration of ’Nubiana’ was WPM+NAA 1.0 mg·L-1+6-BA 0.5 mg·L-1+TDZ 2.0 mg·L-1+sucrose 30.0 g·L-1+agar 6.8 g·L-1, by 6.7% of adventitious bud rate. The callus was sub-cultured under white light.At last, the optimal medium for petioles culture of ’Nubiana’ was WPM+TDZ 0.5 mg·L-1+sucrose 30.0 g·L-1+agar 6.0 g·L-1. Selecting explants which had been sub-cultured around 21 d, the best duration of dark was 14 d, by 35% of adventitious bud rate. Adventitious shoots were mainly regenerated at proximal cutting region.
        

中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导、保存及植株再生研究

摘要6-7
Abstract7
1 前言9-19
    1.1 问题的提出9
    1.2 李离体培养及遗传转化研究进展9-14
        1.2.1 茎尖和茎段培养10-11
        1.2.2 胚培养11-12
        1.2.3 叶片培养12-14
        1.2.4 原生质体培养14
        1.2.5 遗传转化14
    1.3 愈伤组织类型及状态调控14-18
        1.3.1 影响愈伤组织发生的因素15-17
        1.3.2 愈伤组织状态调控17-18
    1.4 本研究的目的及意义18-19
2 材料与方法19-25
    2.1 试验材料19
    2.2 试验方法19-23
        2.2.1 中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导19-21
        2.2.2 中国李‘Nubiana’愈伤组织保存21-22
        2.2.3 中国李‘Nubiana’愈伤组织植株再生22-23
        2.2.4 中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生23
    2.3 试验观察结果及数据统计方法23-25
        2.3.1 中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导23
        2.3.2 中国李‘Nubiana’愈伤组织保存23
        2.3.3 中国李‘Nubiana’愈伤组织植株再生23-24
        2.3.4 中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生24-25
3 结果与分析25-39
    3.1 中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导25-32
        3.1.1 外植体对中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导的影响25
        3.1.2 中国李‘Nubiana’愈伤组织生长状况25-26
        3.1.3 激素种类对中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导的影响26
        3.1.4 激素浓度配比对中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导的影响26-27
        3.1.5 暗培养时间对中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导的影响27
        3.1.6 叶龄对中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导的影响27-30
        3.1.7 琼脂浓度对中国李‘Nubiana’愈伤组织诱导的影响30-32
    3.2 中国李‘Nubiana’愈伤组织保存32-35
        3.2.1 中国李‘Nubiana’愈伤组织保存时愈伤组织生长状况32
        3.2.2 基本培养基、激素浓度及配比、碳源及氮源对中国李‘Nubiana’愈伤组织保存的综合影响32-33
        3.2.3 暗培养时间对中国李‘Nubiana’愈伤组织保存的影响33-34
        3.2.4 琼脂浓度对中国李‘Nubiana’愈伤组织保存的影响34
        3.2.5 继代时间对中国李‘Nubiana’愈伤组织保存的影响34-35
    3.3 中国李‘Nubiana’愈伤组织植株再生35-36
        3.3.1 外源添加物对中国李‘Nubiana’愈伤组织植株再生的影响35
        3.3.2 激素浓度配比对中国李‘Nubiana’愈伤组织植株再生的影响35-36
    3.4 中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生36-39
        3.4.1 中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生36
        3.4.2 激素浓度配比对中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生的影响36
        3.4.3 叶龄对中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生的影响36-38
        3.4.4 琼脂浓度对中国李‘Nubiana’叶柄培养与植株再生的影响38-39
4 讨论39-41
    4.1 激素对中国李‘Nubiana’愈伤组织培养的影响39-40
    4.2 光照培养对中国李‘Nubiana’愈伤组织培养的影响40-41
5 小结41-42
参考文献42-47
图版和图版说明47-52
致谢52-53
附录Ⅰ53-54
附录Ⅱ 课题资助项目54
附录Ⅲ 硕士期间已接收论文54
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