血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化
作者:魏琴,张雪,马磊,李志强,寿玺,段明军,吴硕,贾麒钰,马创 单位:新疆医科大学动物实验中心新疆医学动物模型研究重点实验室,新疆医科大学第一附属医院临床医学研究院,新疆医科大学第二附属医院骨科,新疆医科大学第一附属医院骨科中心显微修复外科 本文刊于: 《中国组织工程研究》 2021年第0期
关键词:
干细胞 骨髓间充质干细胞 血小板衍生生长因子BB 成骨细胞 钙结节 碱性磷酸酶Keywords:
stem cells,bone marrow mesenchymal stem cells,platelet-derived growth factor BB,osteoblasts,calcium nodules,alkaline phosphatase
摘要
背景:研究表明,小鼠前破骨细胞分泌的血小板衍生生长因子BB可以促进成骨细胞和成血管细胞形成,尚无血小板衍生生长因子BB是否可以促进骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的相关研究。目的:探讨血小板衍生生长因子BB诱导大鼠骨髓间充质干细胞向成骨细胞分化的可行性。方法:①体外分离培养SD大鼠骨髓间充质干细胞,第3代细胞经流式鉴定其表面标记物CD45、CD29和CD34的表达,选用纯度较高的骨髓间充质干细胞进行血小板衍生生长因子BB干预实验;②第3代骨髓间充质干细胞经25μg/L血小板衍生生长因子BB诱导3 d,进行Ⅰ型胶原免疫荧光染色,然后采用碱性磷酸酶改良钙钴法和偶氮偶联法、茜素红法对细胞进行染色,鉴定成骨细胞的表面特征,最后采用RT-PCR检测Runx-2和Gli-2的mRNA水平。结果与结论:①经细胞免疫荧光染色,诱导后细胞的Ⅰ型胶原绿色荧光表达率>90%;②经碱性磷酸酶改良钙钴法染色,可见细胞胞质中有黑色条索状附着,说明这些细胞均表达有活性的碱性磷酸酶;经碱性磷酸酶偶氮偶联法染色,可见细胞胞浆中含有蓝色的有活性的碱性磷酸酶;经茜素红染色,可见细胞聚集在一起形成小的红色的钙结节;③经RT-PCR检测,血小板衍生生长因子BB诱导后Gli-2和Runx-2的mRNA表达均高于未诱导骨髓间充质干细胞(P <0.05);④结果表明,大鼠骨髓间充质干细胞经血小板衍生生长因子BB诱导后可以分化为具有功能的成骨细胞。
基金项目:
新疆维吾尔自治区高校科研计划(XJEDU2020Y022),项目负责人:魏琴;国家自然科学基金(81760397),项目负责人:马创~~