嗜酸乳杆菌GIM1.208β-葡萄糖苷酶的异源表达、纯化及酶学性质研究

本文刊于: 《生物化学与生物物理进展》 2021年第0期

关键词:
葡萄糖苷酶(BGL) 异源表达 纯化 酶学性质 圆二色谱 同源建模

Keywords:
β-glucosidase,heterologous expression,purification,enzymatic properties,CD spectroscopy,homology modeling
摘要
     嗜酸乳杆菌(Lactobacillus acidophilus)是益生菌,前期研究发现Lactobacillus acidophilus GIM1.208所产生的β-葡萄糖苷酶(BGL)具有较高活性,为探明其结构与特性,本研究采用PCR体外扩增技术获得Lactobacillus acidophilus GIM1.208 BGL的目的基因,并在大肠杆菌中成功表达,经镍亲和层析等蛋白质纯化技术获得纯度达90%以上的蛋白质样品,进而通过圆二色光谱法(CD)和同源建模法对BGL的二级结构和三级结构进行测定分析并研究其酶学性质.结果表明,Lactobacillus acidophilus BGL的分子质量为52 ku,纯化后浓度为1.88 g/L,二级结构包括15.9%α螺旋、44.1%β折叠、18.1%β转角、27.2%无规则卷曲,其三维结构显示,该蛋白质有8个β折叠和8个α螺旋,整体呈圆锥形. Lactobacillus acidophilus BGL具有良好的葡萄糖耐受性与NaCl耐受性,最适反应温度为47℃,最适反应pH为5.6,在20℃~50℃范围内和pH2.2~6.0间有较高的稳定性,且乙酸乙酯、甲醇对酶活性抑制作用明显,Fe3+、Fe2+对酶有显著激活作用.上述研究结果为Lactobacillus acidophilus BGL后续功能发掘和应用研究提供了重要参考依据.

基金项目:
国家自然科学基金(31860446);贵州省科学技术基金(黔科合基础[2019]1104);贵州省科技计划(黔科合平台人才[2018]5781号)资助项目~~

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